Джотто ди Бондоне родился в 1266 или 1267 г. в деревне Веспиньяно недалеко от Флоренции в семье мелкого землевладельца. Предположительно в возрасте 10 лет Джотто начал учиться живописи в мастерской Чимабуэ, известного флорентийского живописца. 
        

Первое упоминание о Джотто относится к 1298; оно содержится в документе о полученной им оплате за мозаику Навичелла в старом соборе св. Петра в Риме; при перенесении из собора она, к сожалению, утратила свой первоначальный облик. Самые ранние из сохранившихся работ художника – сцены из жития св. Франциска в верхней церкви в Ассизи (1300–1304). Однако эти фрески сильно переписаны, и многие исследователи не признают их подлинными произведениями мастера. Стиль Джотто достиг зрелости во фресках капеллы дель Арена в Падуе (1304–1306). Капелла перекрыта коробовым сводом; на торцовой стене помещено изображение Страшного суда, а на боковых – сцены из жизни Христа и Богоматери, расположенные в три регистра. Сдержанность и достоинство в трактовке сюжетов, пластическая моделировака объемов, четкость пространственных построений, выразительность жестов и поз, светлый праздничный колорит и внутреннее художественное единство делают эти росписи уникальными в истории монументально-декоративной живописи.

Джотто был гражданином Флоренции, хотя работал также в Ассизи, Риме, Падуе, Неаполе и Милане. Его талант художника и практическая деловая хватка обеспечили ему солидное состояние. Несмотря на то, что мастерская Джотто процветала, история сохранила всего лишь несколько полотен, подписанных его именем, да и те, по мнению специалистов, скорее всего принадлежат кисти его помощников.
         Яркая личность Джотто выделяется среди итальянских мастеров Проторенессанса, прежде всего, склонностью к новаторству, к созданию новой художественной манеры, предопределившей классический стиль грядущей эпохи Возрождения. Его живопись воплощает в себе идею человечности и несет первые зачатки гуманизма.
         В 1290—99 гг. Джотто создал росписи Верхней церкви Сан-Франческо в Ассизи — 25 фресок, живописующих сцены из Ветхого Завета, а также эпизоды из жизни Франциска Ассизского («Чудо источника»). Фрески отличаются наглядностью, незамысловатой повествовательностью, наличием бытовых деталей, придающих жизненность и естественность изображаемым сценам. Отвергнув господствовавший в искусстве того времени церковный канон, Джотто изображает своих персонажей похожими на реальных людей: с пропорциональными, приземистыми телами, круглыми (а не удлиненными) лицами, правильным разрезом глаз и т.п. Его святые не парят над землей, а прочно стоят на ней обеими ногами. Они помышляют скорее о земном, чем о небесном, переживая вполне человеческие чувства и эмоции. Впервые в истории итальянской живописи душевное состояние героев живописного произведения передается мимикой лица, жестами, позой. Вместо традиционного золотистого фона на фресках Джотто изображен пейзаж, интерьер или скульптурные группы на фасадах базилик. В каждой композиции художник изображает лишь один момент действия, а не последовательность различных сцен, как это делали многие его современники.
         В начале 1300-х гг. художник посетил Рим. Знакомство с позднеантичной живописью и произведениями П. Каваллини способствовало становлению его творческого метода.
         Творческие достижения Джотто получили дальнейшее развитие в росписях капеллы Скровеньи (капеллы дель Арена) в Падуе, выполненных им в 1304—06 гг. Расположенные на стенах капеллы в 3 яруса, фрески живописуют сцены из жизни Иоакима и Анны («Иоаким среди пастухов», «Жертвоприношение Иоакима», «Сон Иоакима», «Встреча у Золотых Ворот»), Девы Марии и Христа («Рождество», «Поклонение волхвов», «Бегство в Египет», «Избиение младенцев», «Крещение Христа», «Воскрешение Лазаря», «Иуда, получающий плату за предательство», «Поцелуй Иуды», «Несение креста», «Распятие», «Оплакивание Христа», «Воскресение»), а также сцены Страшного Суда. Эти росписи — главное произведение и вершина творчества художника.
         В 1300—02 гг. Джотто выполняет росписи в церкви Бадия во Флоренции.
         К 1310—20 гг. исследователи относят знаменитый алтарный образ «Мадонна Оньиссанти». Композиция не подписана, однако исследователи единодушно приписывают ее Джотто.
         В 1320-е гг. Джотто создает росписи капелл Перуцци и Барди во флорентийской церкви Санта-Кроче на темы житий Иоанна Крестителя, Иоанна Евангелиста и Франциска Ассизского («Стигматизация св. Франциска», «Смерть и вознесение св. Франциска»).
         В 1328—33 гг. Джотто при посредстве многочисленных учеников делал росписи при неаполитанском дворе короля Роберта Анжуйского, который пожаловал художнику титул «придворного».
         С 1334 г. Джотто руководил строительством собора Санта-Мария дель Фьоре и городских укреплений во Флоренции, чем снискал широкое признание среди современников и граждан Флоренции. Джотто приписывают также проект кампанилы (колокольни) флорентийского собора (начата в 1334 г., строительство продолжено в 1337—43 гг. Андреа Пизано, завершено около 1359 г. Ф. Таленти).
         Джотто был дважды женат и имел восемь детей.
         В 1337 г. Джотто умер.