Автор................................................................Н. С. Егоров.
Название..............................Промышленная микробиология.
Издательство..............................."Высшая школа", Москва.
Год...............................................................................1989.
Формат.........................................................................djvu.
Язык........................................................................Русский.
Размер....................................................................13,1 Мб.
Страниц........................................................................688.
ISBN..............................................................5-06-001482-7.
Для сайта https://www.facebook.com/clostridium.propionicum

В пособии приведены характеристики мнкроорганизмов, методы их получения, выделения, селекции, культивирования и хранения, перспективы развития производств, основанных на примене­нии микроорганизмов в биотехнологических процессах (получение пищевого и кормового белка, ферментом, удобрений, аитибиотиков, кислот и др.). Рассматриваются вопросы применения микроорганизмов в процессах брожения, при добыче полезных ископаемых, очистке окружающей среды и др.

Перед микробиологической промышленностью страны постав­лены большие задачи по ускоренному развитию производств, базирующихся на микробиологическом синтезе, и обеспечению значительного роста выпуска продукции. В решении этой огромной народнохозяйственной задачи должны принять активное участие не только ученые — микробиологи, химики и технологи, но и вы­пускники университетов, специализировавшиеся но микробиоло­гии. Вооружение будущих специалистов знаниями в области промышленной микробиологии — составная часть подготовки кад­ров микробиологов, один из основополагающих разделов обуче­ния студентов по названной специальности.

Скачать бесплатно книгу "Промышленная микробиология".

Первую и вторую фазы нитрификации можно наблю­дать и в жидких средах. Однако в них процессы менее наглядны.

Состав питательной среды для первой фазы (в %):

(NH4)2SO4 - 0,2; К2НРО4 - 0,1; MgSO4 - 0,05; NaCl - 0,2; FeSO4 - 0,04; CaCO3 или MgCO3 - 0,5.

Состав питательной среды для второй фазы (в %):

NaNO2 - 0,1; Na2CO3 (безводный) - 0,1; NaCl - 0,05; К2НРО4 - 0,05; MgSO4 - 0,05; FeSO4 - 0,04.

Для получения накопительной культуры среды после хорошего встряхивания (взбалтывания) разливают по 30 мл в эрленмейеровские колбы емкостью 100 мл, заражают небольшим количеством почвы (четверть чайной ложки) и ставят в термостат при температуре 25- 30°С. Спустя 7 дней (а иногда 14 или 21 день) в среде для первой фазы нитрификации появляется азотистая, а в среде для второй - азотная кислота. После исчезнове­ния аммиака (для первой фазы) и азотистой кислоты (для второй фазы) опыт заканчивают.

При изучении первой фазы нитрификации устанав­ливают образование азотистой кислоты (реакция ка­пельная с реактивом Грисса или цинк-йод-крахмалом в кислой среде). При исследовании второй фазы - после исчезновения нитрита проводят капельную реакцию на нитрат с дифениламином. Для изучения возбудителей первой и второй фазы нитрификации из соответствующих культур с поверхности среды петлей захватывают не­много материала и готовят мазок.

Приготовление кремнекислого геля.
Соляную кислоту плотностью 1,19 в высоком цилиндре разбавляют водой до плотности 1,10 (на каждые 500 мл крепкой соляной кислоты можно добавить примерно 500 мл дистиллиро­ванной воды). Жидкое стекло наливают в высокий ци­линдр и разводят водой до плотности 1,06 - 1,08; на 500 мл воды можно прилить 100 мл стекла (его можно заменить 35%-ным раствором кремнекислого натрия). Цилиндры и ареометр после разбавления стекла тща­тельно отмывают.

Соляную кислоту плотностью 1,10 смешивают с жид­ким стеклом плотностью 1,06 (а для более плотного ге­ля - 1,08) в равных объемах; стекло осторожно прибав­ляют (при постоянном помешивании) к соляной кислоте. Для устранения возможности появления в толще геля чечевицеобразных полостей при стерилизации (по Н. М. Лазареву) раствор соляной кислоты и стекла нагрева­ют до кипения и смешивают. Затем смесь перемешивают и разливают в чашки слоем не менее 0,7 см. Через 8 - 12 ч образуется гель. Дав ему хорошо застыть и обсох­нуть сверху, чашки с гелем помещают в эмалированную кастрюлю или в большой стеклянный сосуд и ставят под кран для промывки. На водопроводный кран надевают толстую каучуковую трубку, конец которой опускают на дно кастрюли или сосуда. Струя воды должна быть сла­бая. Промывают кремневые пластины до исчезновения следов хлора (проба 1%-ного AgNO3 в присутствии НNО3), окунают в кипящую воду, а при необходимости стерилизуют в кипятильнике Коха при температуре 100°С 30 мин (3 раза через 24 ч).

Приготовление реактивов и ход реакций.
1. Реактив Грисса состоит из двух растворов: первый - 0,5 г сульфаниловой кислоты в 150 мл разбавленной уксусной кис­лоты; второй - 0,1 г а-нафтиламина в 20 мл воды с до­бавлением 150 мл разбавленной уксусной кислоты. В пробирку наливают по 10 мл обоих растворов и 10 мл исследуемого раствора и кипятят. В присутствии азоти­стой кислоты появляется красное окрашивание (реак­тив очень чувствителен к HNO3).

2. Цинк-йод-крахмал. 4 г крахмала размешивают с небольшим количеством воды, затем при постоянном по­мешивании прибавляют к кипящему раствору хлористый цинк (20 г в 100 мл воды). Смесь кипятят до растворе­ния крахмала, добавляют 2 г сухого йодистого цинка и доливают водой до 1 л. Раствор хранят в темном месте.

Реакцию проводят следующим образом: в лунку фар­форовой пластинки вносят каплю цинк-йод-крахмала, каплю 10%-ной серной кислоты и каплю исследуемого субстрата. В присутствии азотистой кислоты появляется темно-синее окрашивание.

3. Дифениламин в растворе крепкой серной кислоты. Каплю дифениламина вносят в лунку фарфоровой пластинки и к ней добавляют каплю испытуемого раствора. Если в растворе содержится азотная кислота, то обра­зуется темно-синее окрашивание; то же получается и при наличии азотистой кислоты. Поэтому пробу на нит­раты с дифениламином используют при отсутствии нит­рита.

Автор...............................................................Н. П. Елинов.
Название...................................Химическая микробиология.
Издательство..............................."Высшая школа", Москва.
Год...............................................................................1989.
Формат.........................................................................djvu.
Язык........................................................................Русский.
Размер....................................................................10.2 Мб.
Страниц........................................................................448.
ISBN..............................................................5-06-000089-3.
Для сайта https://www.facebook.com/clostridium.propionicum

Учебник включает материалы о химическом составе, строении, топологии и функции микро- и макромолекул в микробных клетках. Изложены химические основы процессов роста, развития, размножения, днфференцировки, обмена ве­ществ и патогенности микроорганизмов, а также протиеомикробного иммуни­тета.

Химическая микробиология — самостоятельная научная дис­циплина, сформировавшаяся к началу 50-х годов и представляю­щая собой ветвь общей микробиологии. Химическая микробиоло­гия является наукой о химии и биохимии микроорганизмов, изу­чающей химический состав, строение, топологию, функцию сво­бодных и конъюгированных молекул, а также обмен веществ прокариот и эукариот.

Скачать бесплатно книгу "Химическая микробиология".

Под нитрификацией понимают процессы окисления аммиака до нитрита и нитрата. Превращение аммиака в нитрит и нитрат идет в две фазы и вызывается глав­ным образом бактериями двух родов (нитрифицирую­щие бактерии):

Nitrosomonas: NH4 + 1 1/2O2 = NO2 + 2H + H2O;

Nitrobacter: NО2 + 1/2О2 = NO3

Энергию, возникающую при окислении аммиака и нитрита, бактерии используют для ассимиляции угле­кислого газа. Микроорганизмы, осуществляющие этот процесс, относятся к хемолитоавтотрофам и являются облигатными аэробами.

Для выявления бактерий первой фазы нитрификации и определения относительной плотности населения их в почве, используют метод Виноградского на гелевых пла­стинах.

Промытые, прокипяченные чашки Петри с кремне­кислым гелем пропитывают 3—5 мл питательной среды следующего состава (в г на 200 мл дистиллированной воды):

(NH4)2SO4 - 2,0; К2НРO4 - 1,0; MgS04 - 0,5; NaCl - 0,4; FeSO4 - 0,4; MgCO3 или CaCO3 - 5,0.

При этом MgCO3, СаСO3 перед приготовлением сре­ды растирают пестиком в стерильной ступке.

Питательную среду в чашках упаривают (при 40 - 50°С) до образования белой блестящей эмалевой по­верхности, возникающей за счет равномерного распре­деления слоя MgCO3 или СаСO3.

Оба эти слоя служат индикаторами процесса нитри­фикации, так как в тех местах на геле, где развиваются эти бактерии, появляются зоны растворения карбона­тов, в которых и обнаруживают нитрифицирующие бак­терии.

По эмалевой поверхности пластины раскладывают определенное число комочков свежей почвы. Для этого берут два часовых стекла, стерилизуют их (фламбиро-ванием), затем в одно часовое стекло помещают поч­ву, а в другое наливают дистиллированную воду. Па­лочкой с оттянутым концом (предварительно ее слегка проводят над огнем и смачивают водой) захватывают комочек почвы (диаметр 1 - 2 мм) и по трафарету по­мещают на поверхность эмалевой пластины.

Чашки помещают во влажную камеру и ставят в термостат при температуре 28—30°С. Через некоторое время в зависимости от активности нитрифицирующих бактерий (спустя 7, 14, 21 день) вокруг отдельных ко­мочков почвы появляются зоны растворения мела, сви­детельствующие об обрастании комочков почвы нитрифицирующими бактериями. Чашки вынимают и подвер­гают анализу: определяют процент обрастания комочков почвы нитрифицирующими бактериями, изучают по морфологии их представителей и продукты жизнедея­тельности.

Для изучения процента обрастания комочков почвы сначала подсчитывают общее число комочков почвы, разложенных на чашке, и принимают их за 100%. За­тем подсчитывают число комочков почвы, давших зоны растворения мела, и высчитывают, какой процент они составляют от общего числа комочков почвы. Эта вели­чина не показывает абсолютное количество этих бакте­рий в почве. Однако если сопоставить процент обраста­ния ими комочков разных почв, то этот показатель позволит судить о том, какая почва более богата нитри­фицирующими бактериями.

Чтобы познакомиться с продуктами жизнедеятельно­сти бактерий первой фазы нитрификации, надо чистым ланцетом вырезать по три кусочка геля из зон растворе­ния мела и с мест, в которых мел не растворился, поместить эти кусочки изолированно в лунки белой фарфо­ровой пластины или в фарфоровые чашки. Сначала де­лают пробы с кусочками геля с контрольных участков (где мел не растворился). Пробу делают на аммиак с реактивом Несслера; гель приобретает желтовато-оран­жевую окраску, что свидетельствует о присутствии ам­миака. Затем пробу делают на нитрит с реактивом Грисса или цинк-йод-крахмалом, добавляя каплю 10%-ной серной кислоты; гель остается без изменения, что указы­вает на отсутствие нитрита.

Аналогичные пробы делают с кусочками геля, взяты­ми из зон растворения мела (или MgCO3). В этом слу­чае реакция на аммиак с реактивом Несслера отрица­тельная (гель не окрашивается). Реактив Грисса окра­шивает его в красный цвет, а с циик-йод-крахмалом в кислой среде гель окрашивается в темно-синий цвет, что свидетельствует о появлении азотистой кислоты.

Для знакомства с возбудителями первой фазы нит­рификации из зон растворения мела берут иглой немно­го материала и готовят окрашенный препарат. При его микроскопировании можно обнаружить овальные клет­ки, похожие на нуль, - Nitrosomonas и Nitrosospira. Первые встречаются в старопахотных почвах, вторые - в целинных. В почвах Европы чаще встреча­ются Nitrosomonas europea.






Микроорганизмы, вызывающие вторую фазу нитри­фикации, можно наблюдать на чашках с культурой пер­вой фазы при более длительном стоянии их. После исчезновения аммиака образовавшийся нитрит может окисляться до нитрата. В этом легко убедиться по ис­чезновению нитрита и появлению нитрата. Для этого вырезают чистым ланцетом два кусочка геля, помещают их в фарфоровые лунки и об исчезновении нитрита су­дят по отрицательной реакции с реактивом Грисса или цинк-йод-крахмалом в кислой среде. С другим кусочком геля делают пробу на нитрат с дифениламином в раст­воре крепкой верной кислоты. В присутствии азотной кислоты гель приобретает темно-синий цвет (реакцию на нитрат с дифениламином делают только в отсутствие нитрита). В препарате, приготовленном из мест раство­рения мела, взятого с поверхности чашки, в этот период можно обнаружить возбудителей второй фазы нитрифи­кации — мелкие, слегка искривленные и угловатые клет­ки Nitrobacter.



В связи с тем что коэффициент полезного действия хемосинтеза у нитрифицирующих бактерий очень низ­кий, рост клеточной массы их незначителен, и в препа­ратах, приготовленных обычным способом, они не всег­да обнаруживаются или обнаруживаются с трудом.

Для выявления нитрифицирующих бактерий обеих фаз из культуры на гелевых пластинах разработан при­ем (Е. 3. Теппер), который дает весьма удовлетвори­тельные результаты. В чашку, в которой прошли процес­сы нитрификации, осторожно вливают дистиллирован­ную воду, бактерии при этом собираются на поверхности воды. Если к поверхности воды прикоснуться чистым обезжиренным предметным стеклом, то на нем остаются нитрифицирующие бактерии. После сушки и фиксации препарата его красят фуксином и рассматривают под микроскопом с иммерсионной системой.

В препаратах из чашек, в которых прошли первая и вторая фазы нитрификации, можно легко обнаружить представителей обоих родов нитрифицирующих бактерий и нх спутников, в частности бактерии рода Bactoderma, всегда сопровождающие вторую фазу нитрифи­кации.

Для специального наблюдения за процессом второй фазы нитрификации опыт также можно ставить на ге­левых пластинах. Их пропитывают 2 - 3 мл питательной среды следующего состава (в г на 200 мм дистиллиро­ванной воды):

NaNO2 - 1,0; Na2CO3 (безводный) - 1,0; NaCl - 0,5; K2HPO4 - 0,5; MgS04 - 0,5; FeSO4 - 0,4.

Среду упаривают при 50°С до исчезновения свобод­ной воды и по поверхности геля, как в предыдущем опы­те, раскладывают комочки почвы. Затем после 20 - 30 дней инкубации при 28 - 30°С анализируют, как и в пре­дыдущем опыте.

Автор...................................................................И. Хиггинс.
Название...............Биотехнология. Принципы и применение.
Издательство................................................"Мир", Москва.
Год...............................................................................1988.
Формат.........................................................................djvu.
Язык........................................................................Русский.
Размер......................................................................4,5 Мб.
Страниц.........................................................................480.
ISBN...............................................................5-03-000058-5.
Для сайта https://www.facebook.com/clostridium.propionicum

Книга, написанная коллективом авторов (Англия, США, Швейцария), пред­ставляет собой учебник по биотехнологии, освещающий как новые, так и тра­диционные отрасли промышленности, основанные на применении микроорганиз­мов. Рассмотрено использование микроорганизмов для получения биотоплива, пи­щевых продуктов и биоматериалов, а также применение биотехнологии в хими­ческой промышленности, медицине, сельском хозяйстве и для переработки отхо­дов. Особое внимание уделено связи биотехнологии и химической технологии.

Для студентов вузов и специалистов, занимающихся исследованиями и раз­работками в области биотехнологии.

Биотехнология — это не просто новомодное, броское название одной из древнейших сфер деятельности человека; так могут думать одни только скептики. Само появление этого термина в нашем словаре глубоко символично. Оно отражает широко рас­пространенное, хотя и не общепринятое мнение: считается, что применение биологических материалов и принципов в ближай­шие десять — пятьдесят лет радикально изменит многие отрасли промышленности и само человеческое общество. Нетрудно убе­диться, что интерес к этой науке и темпы ее развития в послед­ние годы росли очень быстро. Свидетельств тому множество. Это и появление бесчисленных небольших частных биотехноло­гических фирм, и образование правительственных комитетов, призванных оценить возможности нового направления, и чтение лекций по биотехнологии во многих университетах. Правитель­ства большинства наиболее развитых стран, как, впрочем, и ря­да развивающихся, уже вложили значительные средства в раз­витие биотехнологии. Надо сказать, что как размеры этих вкла­дов, так и эффективность их использования далеко не одинако­вы. Специалисты, участвующие в развитии биотехнологии, еди­нодушно считают, что в масштабах государства успех в этой...

Скачать бесплатно книгу "Биотехнология. Принципы и применение".

Мочевина — конечный продукт превращения соеди­нений азота в организме человека и животных.

Бактерии, вызывающие аммонификацию мочевины, вырабатывают экзофермент уреазу, который гидролнзует мочевину до аммиака.

CO(NH2)2+2H2O = 2NH3 + CO2 + H2O.

В качестве источника углерода они используют не­которые углеводы и соли органических кислот.

Для наблюдения за процессом аммонификации мо­чевины можно использовать питательную среду следую­щего состава (в г на 1 л дистиллированной воды):

К или Na виннокислый (можно и соль
яблочной кислоты)................5.0
мочевина..............................50,0
К2НРО4..................................0,5
MgSO4....................................0,2

Среду разливают по 30 мл в эрленмейеровские кол­бы емкостью 100 мл, заражают почвой (или навозом) и ставят в термостат при 25 - 30°С. Для обнаружения аммиака, выделяющегося в атмосферу, под ватную пробку подвешивают красную лакмусовую бумажку, смоченную дистиллированной водой.

На 3 - 5-е сутки опыт заканчивают и культуру под­вергают анализу.

Устанавливают выделение аммиака по посинению красной лакмусовой бумажки, а накопление его в субст­рате - капельной реакцией с реактивом Несслера.

К капле этого реактива (на фарфоровой пластинке) добавляют каплю субстрата. Образуется буроватый осадок.

Для изучения возбудителей аммонификации мочеви­ны из едва заметной пленки на субстрате готовят пре­парат и окрашивают его фуксином. Чаще всего под микроскопом встречаются клет­ки Вас.pusteurii, реже Planosarcina ureae и др.

Автор...............................................Б. Глик, Дж. Пастернак.
Название................................Молекулярная биотехнология.
Издательство..............................................."Мир", Москва.
Год...............................................................................2002.
Формат.........................................................................djvu.
Язык........................................................................Русский.
Размер....................................................................9,0 Мб.
Страниц........................................................................589.
ISBN..............................................................5-03-003328-9.
Для сайта https://www.facebook.com/clostridium.propionicum


Современное руководство по биотехнологии, написанное автори­тетными канадскими учеными. В книге подробно изложены основы генной инженерии: механизмы репликации, транскрипции и транс­ляции; методы клонирования, амплификации и секвенирования ДНК; конструирование рекомбинантных ДНК; введение последова­тельностей-мишеней в геном микроорганизмов, растений и живот­ных, а также практическое применение генной инженерии для полу­чения лекарственных веществ, вакцин, факторов роста, инсектици­дов и т.п. Большое внимание уделено генной терапии и связанным с ней морально-этическим проблемам, патентованию биогехнологиче-ских продуктов и способов их получения.

Для студентов университетов, сельскохозяйственных и медицин­ских институтов, а также для научных работников и специалистов по биотехнологии.

Молекулярная биотехнология — это увлекательней­шая область научных исследований, с появлением которой произошел настоящий переворот во взаи­моотношениях человека с живой природой. В ее основе ле­жит перенос единиц наследственности (генов) из одного ор­ганизма в другой, осуществляемый методами генной инженерии (технология рекомбинантных ДНК). В большин­стве случаев целью такого переноса является создание ново­го продукта или получение уже известного продукта в про­мышленных масштабах. В ч. I мы познакомим читателя с концепциями молекулярной биотехнологии и теми микро­организмами, которые в ней используются, с основами мо­лекулярной биологии и методологией рекомбинантных ДНК. Будут описаны такие методы, как химический синтез генов, полимеразная цепная реакция (ПЦР), определение нуклеотидной последовательности (секвенирование) ДНК.

Скачать бесплатно книгу "Молекулярная биотехнология".

Аммонификация - это превращение органических форм азота в аммиачный азот. Вызывается она различ­ными микроорганизмами (бактериями, актиномицетами и грибами).

Аммонификация белковых веществ.

Микроорганизмы, вызывающие аммонификацию бел­ковых веществ, выделяют в окружающую среду протеолитические ферменты, под действием которых эти ве­щества гидролизуются до аминокислот. Последние поступают в клетку и в ней дезаминируются с образова­нием аммиака, органических кислот и других продук­тов. В белке отношение С : N = 3,5 :1.

При разложении белка выделяются также H2S, меркаптаны, скатол и индол, имеющие неприятный запах.

Для изучения аммонификации белковых веществ в качестве питательной среды можно использовать мяс­ной бульон с добавлением 3% пептона.

По 30 мл среды разливают в эрленмейеровские кол­бы емкостью 100 мл и добавляют по одной трети чай­ной ложки почвы. Колбы закрывают ватными пробка­ми. Над средой подвешивают две бумажки - красную лакмусовую, смоченную ди­стиллированной водой (для обнаружения выделяющего­ся аммиака), и фильтроваль­ную, смоченную уксуснокис­лым свинцом (для выявле­ния сероводорода и мер­каптана), закрепляя их между пробкой и стенками горлышка колбы. Бумажки не должны касаться среды. Сверху колбы прикрывают пергаментной бумагой.

На 3 - 5-е сутки инкубации при температуре 28 - 30°С опыт заканчивают и содержимое в колбе анализируют. Определяют продукты жизнедеятельности микроорга­низмов при разложении белка и возбудителей процесса.

Исследование возбудителей гнилостного распада бел­ковых веществ.

Для обнаружения возбудителей готовят препарат живых бактерий (в раздавленной капле), а также фиксированный и окрашенный. Чаще других в препарате встречаются подвижные клетки Proteus vulgaris, преобладающие на первых стадиях распада белков. Это неспорообразующие, не­одинаковой длины палочки. Кроме того, на препарате много спорообразующих клеток Вас.mycoides и Вас.putrificus. У последних споры расположены терминально, и диаметр их шире клетки.

Вас.mycoides вызывает аммонификацию белковых веществ в аэробных условиях. Proteus vulgaris - фа­культативный анаэроб, a Clostridium putrificus вызыва­ет аммонификацию в анаэробных условиях. Последняя форма может развиваться как аэроб, если в среде нахо­дятся аэробные микроорганизмы, поглощающие кисло­род.

Для определения продуктов гнилостного распада белка делают следующие анализы.

Проба на аммиак.

Выделяющийся в атмосферу МН3 улавливается подвешенной красной лакмусовой бумаж­кой, которая при этом синеет.

Накопление аммиака в субстрате устанавливают при помощи реактива Несслера. Реакция капельная. На фарфоровые пластинки с лунками или в чашки по­мещают каплю реактива Несслера, затем каплю субст­рата. При большом количестве аммиака образуется коричневый или буроватый осадок, при небольшом - появляется оранжевая или желтая окраска.

Проба на сероводород.

Его обнаруживают с помо­щью подвешенной фильтровальной бумажки, смоченной уксуснокислым свинцом [РЬ(СН3СОO)2], бумажка чер­неет. Если она покрывается серебристым налетам, это свидетельствует о том, что наряду с сероводородом вы­деляются еще и меркаптаны (например, метилмеркаптан CH3SH).

Проба на индол.

Для выявления индола пользуются или реакцией Салькозского, или реакцией с парадиметиламидобензальдегидом. В первом случае к 10 мл субстрата добавляют 1 мл 0,2%-ного KNO2 и несколько капель крепкой серной кислоты. При взаимодействии этих веществ с индолом получается красно-фиолетовое окрашивание. Эту реакцию дает также индолилуксусная кислота. Вторая реакция на индол более специфична. К 10 мл субстрата (однодневной культуры) добавляют 5 мл парадиметиламидобензальдегида и 5 мл насыщен­ного раствора сернокислого калия. При наличии индо­ла возникает интенсивно-красное окрашивание.

Автор.................................................................М. Е. Бекер.
Название...................................Введение в биотехнологию.
Издательство.........................."Пищевая промышленность".
Год...............................................................................1978.
Формат.........................................................................djvu.
Язык........................................................................Русский.
Размер.....................................................................1,8 Мб.
Страниц........................................................................231.
ISBN................................................................................._.
Для сайта https://www.facebook.com/clostridium.propionicum

БЕКЕР М. Е. ВВЕДЕНИЕ В БИОТЕХНОЛОГИЮ. Пер. с латышского (Рига, 1974), 1978.В книге изложены основы микробиологического получения белковых а хлебопекарных дрожжей, бактериальных удобрений, вакцин, липидов, поли­сахаридов, спиртов, органических кислот, аминокислот, витаминов, антибио­тиков, ферментов. Показаны принципы микробиологической трансформации органических соединений и сущность очистки сточных вод. Эти вопросы рас­смотрены в технологическом аспекте с краткой характеристикой биохимии и микробиологии каждого процесса.В книге впервые систематизированы сведения по получению аминокислот, витаминов, липидов, микробных полисахаридов, по трансформации органиче­ских веществ. Для их производства служат отходы пищевой промышленности, которые не всегда рационально используются.

Самым важным процессом в живой природе, от которого зависит существование человека, является фотосин­тез. Он осуществляется растениями, содержащими зеленый пиг­мент хлорофилл. Микроорганизмы (дрожжи, плесневые грибы и бактерии) являются бесхлорофильными низшими растениями. Однако некоторые низшие одноклеточные растения, например хлореллы, содержат хлорофилл и, следовательно, осуществляют фотосинтез. Суммарную реакцию фотосинтеза можно записать так:

6CO2 + 6H2O + солнечная энергия = C6H12O6 + 6O2

Скачать бесплатно книгу "Введение в биотехнологию".

В связи с широкой механизацией сельского хозяйст­ва в почву попадает значительное количество углеводо­родов. Так, керосин и бензин, используемые в качестве топлива в тракторных, автомобильных и других двигателях, являются продуктами перегонки нефти или пере­работки нефтепродуктов. В их состав входит высокий процент парафиновых, нафтеновых и ароматических уг­леводородов. В почве эти продукты подвергаются окис­лению микроорганизмами.

Для получения накопительной культуры углеводородокисляющих бактерий в колбу емкостью 250 мл наливают 100 мл жидкой питательной среды (или в колбу емкостью 150 мл - 30 мл среды) следующего со­става (в %):

KNO3 - 0,4; KH2PO4 - 0,06; Na2HPO4 - 0,06; Na2HPO4x12Н2O - 0,14; MgSO4x7H20 - 0,08; водопро­водная вода (рН среды - 7,2 - 7,3 - устанавливают по бромтимолблау.

В качестве единственного источника углерода добав­ляют 2 мл керосина или 2 мл вазелинового масла. Для заражения среды в колбу помещают одну треть чайной ложки почвы из пробы, отобранной у бензоколонки или у гаража. Колбы помещают на качалку в термостат при 30°С.

После 4 - 6-дневной инкубации опыт снимают. Для знакомства с микроорганизмами, окисляющими углево­дороды, из накопительной культуры готовят фиксиро­ванный и окрашенный препарат. Углеводороды хорошо окисляют представители микобактерий (Mycoplana bullata), Arthrobacter и нокардии.

Для проверки способности чистых культур окислять парафин можно использовать метод Макклаига (1955). Для этого готовят стерильную агаризованную среду следующего состава (в г на 1 л дистиллированной во­ды):

NaNO3 - 2,0; MnSO4 - 0,008; K2HPO4 - 1,0; ZnSO4 - 0,002; MgSO4 - 7H2O - 0,5; агар -20; Fe2(SO4)3 - 0,01.

Стерильный расплавленный агар разливают в сте­рильные чашки Петри, в которые одновременно вносят стерильной пипеткой 3 - 4 капли расплавленного сте­рильного парафина, и перемешивают его со средой. После охлаждения на поверхности застывшего агара образуются островки парафина в виде тонких пленок. По поверхности агара сплошным газоном высевают сус­пензию чистой культуры углеводородокисляюших бак­терий, для чего на поверхность агара наносят каплю (0,05 мл) суспензии чистой культуры и шпателем рас­тирают ее по поверхности агара. Чашку помещают вo влажную камеру и ставят в термостат при 28°С.

После 2 - 3 недель инкубации микроорганизмы, способные окислять парафин, разрастаются вокруг пленок парафина и покрывают пленку сплошным толстым слоем.

Автор........................................................................................И. В. Стахеев.
Название.Биотехнология малотоннажного производства микробного протеина.
Издательство........................................................."Наука и техника", Минск.
Год.........................................................................................................1991.
Формат..................................................................................................djvu.
Язык.................................................................................................Русский.
Размер.............................................................................................1,86 Мб.
Страниц.................................................................................................264.
ISBN.......................................................................................5-343-00786-4.
Для сайта..........................https://www.facebook.com/clostridium.propionicum

На основе обобщения литературных и собственных данных ана­лизируются способы получения белковой биомассы микробного про­исхождения из растительного сырья и рассматриваются некоторые технологические решения создания экологически чистых производств. Указываются пути интенсификации синтеза дрожжевого н грибного протеина. Показано, что многочисленные отходы сельского хозяйст­ва н промышленности могут служить перспективным сырьем для по­лучения микробной белковой биомассы, а для улучшения способов культивирования и создания экологически чистых производств не­обходимо применение новых технологических подходов. Обсуждается целесообразность создания цехов по переработке нетрадиционных видов углеводного сырья в дрожжевой белок. Приводятся исходные данные для их проектирования.

Рассчитана на биотехнологов, научных и инженерно-технических работников микробиологической промышленности, специалистов сель­ского хозяйства, а также аспирантов н студентов биологических и технологических вузов.

Важнейшими видами сырья для производства мик­робного протеина являются ископаемое топливо (уголь, нефть, природный газ) и продукты фотосинтетической деятельности растений. Уголь может быть превращен в газ или жидкие углеводороды. Для быстрой конверсии дрожжами предпочтительны углеводороды нефти с 10— 20 углеродными атомами. Нефть содержит около 2% этих соединений, и утилизация углеводородной фракции из ежегодной добычи способна обеспечить получение около 20 млн т дрожжевого протеина. Выход протеина из жидких углеводородов в 2 раза больше, чем из угле­водных субстратов. В масштабах производства из 100 т углеводородов образуется 100 т дрожжей, содержащих 50% протеина. Бактерии и грибы также способны к ро­сту на этом субстрате. Для поддержания активного ро­ста дрожжевые клетки и нерастворимые в воде углеводо­роды тщательно диспергируются в культуральной водной среде, кислород подается в количествах, больших, чем это необходимо для роста на углеводных субстратах, а наличие в нефти потенциально токсичных ароматиче­ских соединений требует очистки углеводородов от них до использования либо экстракции всех остаточных угле­водородов из выращенных клеток.

Скачать бесплатно книгу "Биотехнология малотоннажного производства микробного протеина".

Жир попадает в почву с растительными и животны­ми остатками, с отмершими клетками микроорганиз­мов. Микроорганизмы, окисляющие жир, выделяют фер­мент липазу, который вызывает гидролиз жира по урав­нению:

С3Н5(С18Н35O2)3 + ЗНОН = С3Н5(ОН)3 + ЗС18Н36O2
глицерин стеариновая кислота

Продукты гидролиза в дальнейшем окисляются до углекислого газа и воды:

C18Н36O2 + 26O2 = 18СО2 + 18Н2O

Для знакомства с процессом окисления жира и его возбудителями достаточно сначала приготовить элективную минеральную среду, не содержащую источ­ника углерода, - среду Рана:

К2НРO4 - 5 г; СаСl2 - 1 г; (NH4)3PO4 - 5 г; NaCl - следы; MgSO4 - 1 г; FeCl3 - следы, дистиллированная вода -1 л.

Затем наливают 30 мл в эрленмейеровскую колбу емкостью 100 мл и добавляют одну треть чайной ложки почвы (для внесения возбудителей процесса). В качестве источника углерода добавляют жир - кусочек расплавленного свиного са­ла или говяжьего жира. Хоро­шо получается культура жироокисляющих бактерий и грибов на касторовом масле. В 30 мл среды достаточно внести 1 мл масла.

По мере развития жироокисляющих микроорганиз­мов прозрачное касторовое ма­сло превращается в белые хлопья нерастворимых в воде жирных кислот.

О степени омыления жи­ра можно судить по его кислотному числу, которое определяют титрованием рас­твора жира и жирных кислот в смеси спирта с эфиром (1:1) 0,1 н. спиртовым раствором КОH.

В качестве индикатора при титровании применяется фенолфталеин.

Для микроскопических наблюдений готовится препа­рат с поверхности жирных кислот или из жидкости колбы.

Сушат препарат при комнатной температуре, фик­сируют смесью спирта с эфиром (1:1), удаляя одновре­менно остатки жира, затем красят фуксином.

При микроскопировании можно обнаружить неспо­роносную палочку типа Pseudornonas fluorescens, Pseudornonas stutzeri, иногда на жире разви­ваются актиномицеты и грибы Geotrichum candidum (Oidium tactis).

10 просмотров

Автор............................................................................А. А. Воробьев.
Название......Медицинская микробиология, вирусология и иммунология.
Издательство..............................................................."МИА", Москва.
Год...............................................................................................2004.
Формат........................................................................................djvu.
Язык........................................................................................Русский.
Размер...................................................................................12,8 Мб.
Страниц........................................................................................688.
ISBN..................................................................................................-.
Для сайта..........................................https://twitter.com/ClPropionicum

Микробиология и иммунология относятся к базовым дисциплинам, знание которых не­обходимо каждому врачу, каждому медицин­скому работнику, так как эти науки решают или способствуют решению важных проблем клинической, медико-профилактической и теоретической медицины.

В наше время без знания микробиологии и иммунологии уже немыслимо решение таких важных проблем медицины, как снижение инфекционной заболеваемости людей и лик­видация инфекционных болезней, искорене­ние внутрибольничных заболеваний, вызван­ных условно-патогенными микроорганизма­ми, лечение и профилактика аллергических и иммунопатологических проявлений, прогресс в диагностике и лечении онкологических бо­лезней, решение проблем трансплантации органов и тканей, репродукции в акушерстве и гинекологии, а также решение многих и многих задач в хирургии и других клиничес­ких дисциплинах, а также санитарно-гигие­нических и экологических вопросов. Следует иметь в виду, что около 70 % всех регистриру­емых заболеваний являются инфекционны­ми, а в патогенезе многих неинфекиионных болезней (злокачественные новообразования, атеросклероз, психические, нервные, аутоим­мунные и лр.) непосредственную или косвен­ную роль играют микробы. Решение проблем вышеуказанной патологии, разумеется, почти невозможно без знания микробиологических аспектов их этиологии, патогенеза, профи­лактики и терапии.

Скачать бесплатно книгу "Медицинская микробиология, вирусология и иммунология".

В окислении клетчатки в аэробных условиях участ­вуют аэробные бактерии, актииомицеты и грибы.

Эти микроорганизмы выделяют ферменты - целлюлазу и целлобиазу, разлагающие клетчатку до глюкозы, которую они окисляют до СO2 и Н2O; промежуточ­ным продуктом являются оксикислоты.

За окислением клетчатки можно наблюдать, поль­зуясь методом Внноградского на гелевых пластинах.

Промытые и прокипяченные гелевые пластины про­питывают 2 - 3 мл питательной среды следующего со­става (в г на 200 мл дистиллированной воды):

KNО3.............2.5 NaCl............0,5
К2НРО4.........1.0 FeSO4........0,01
MgSO4...........0,5 Mn2(SO4)3..0,01

Поверхность геля покрывают стерильным кружком фильтровальной бумаги, по которому раскладывают (по трафарету) 50 комочков почвы (диаметром 1 - 2 мм) или наносят суспензию соответствующего разбавления. Чашки помещают во влажную камеру и ставят в термо­стат при температуре 28 - 30°С.

На 8 - 10-е сутки вокруг комочков появляются коло­нии в виде розовых, зеленых, желтых, буровато-желтых пятен. Микроскопирование препаратов, приготовленных из таких колоний, позволяет обнаружить разные виды целлюлозоразрушающих бактерий: a) Cytophaga — бактерии со сложным циклом развития, относя­щиеся к миксобактериям. В молодом возрасте клетки с заостренными концами, при старении они переходят в укороченные палочки с округлыми конца­ми. На клетчатке колонии в виде желтых, розовых, ко­ричневых пятен; б) миксобактерии родов Polyangiuin и Sorangium - молодые клетки палочковидные, при старении они укорачиваются и образуют микроцисты, которые собраны по 12 - 40 кле­ток в цисты. Из них формируются плодовые тела. На клетчатке образуют колонии в виде слизисто­го налета желтого, оранжевого или темно-коричнево­го цвета; в) вибрионы рода Cellvibrio - слегка изогнутые палочки с закругленными концами. Формируют колонии в виде охристых или зеленых пя­тен; г) Cellfalcicula - палочковидные клетки, утолщен­ные в центре, с заостренными концами. Об­разуют на клетчатке слизистые зеленые колонии.

Активно разлагают клетчатку отдельные представи­тели несовершенных грибов родов Trichoderma, Fusarium, Alternaria, Stachybotrys, Cladosporium, Dematium и др. а также актиномицеты.

Плотность обрастания ко­мочков почвы целлюлозо-разрушающнми микроорга­низмами можно выразить в процентах. Число комочков почвы, разложенных на чаш­ке, принимают за 100%. Затем высчитывают процент комочков почвы, давших во­круг себя колонии целлюлозоразрушающих микробов.

При отсутствии гелевых пластин микроорганизмы, окисляющие клетчатку, можно выявить по методу В. Л. Омелянского. Для этого в эрленмейеровские кол­бы емкостью 100—150 мл наливают 30 мл питательной среды, содержащей:

0,1% - NH4CI, 0,05% - К2HРO4 и водо­проводную воду.

В этот раствор погружают складчатый фильтр кону­сом вверх. На границе между воздухом и средой на клетчатке будут развиваться аэробные целлюлозоразрушающие бактерии.

Миксобактерии из рода Sorangium легко обнаружи­ваются в подзолистых почвах, под луговой растительно­стью и на окультуренных почвах. В этих же почвах при благоприятном азотном режиме можно выявить еще и Cellvibrio, а в унавоженных почвах — Cytophaga. В степ­ных почвах наряду с грибами встречаются миксобакте­рии рода Polyangium.

1.


2.


3.


4.


5.


6.


7.


8.


9.


10.


11.


12.

В процессе окисления сахара микроскопическим грибом Aspergillus niger, http://biohimik.livejournal.com/64465.html в культуральной жидкости образуется ряд органических кислот, качественный и количественный анализ которых, нам и нужно определить.



Определение щавелевой кислоты.
К 100 мл фильтрата куль­туры прибавляют на каждый мл 0,1 н. кислоты, 0,05 мл СаСl, т. е. прибавляют с некоторым избытком. Раствор СаСl готовят растворением 100 г СаСОз в 162 мл НCl (плотность 1,19) и до­водят дистиллированной водой до 1 л. В фильтрате выпадает в осадок только щавелевокислый кальций, который отфильтро­вывают через бумажный фильтр, и осадок промывают горячей водой. В воде и в слабом, 2-процентном растворе НСl он прак­тически нерастворим. Затем сырой осадок с фильтра аккуратно переносят в стакан и туда через фильтр наливают горячую 10-процентную H2SO4, для растворения осадка на фильтре и в стакане (при помешивании и, если нужно, при подогрева­нии). Фильтр смывают горячей водой, и горячий раствор в ста­кане титруют 0,1 н. раствором КМnО4. Если почему-либо титро­вание переносится на следующий день, то раствор перед титро­ванием нагревают до 70—80°. 1 мл 0,1 н. раствора КМnО4, соответствует 0,0063 г щавелевой кислоты (С2Н2O4 • 2Н2O).

Определение лимонной кислоты.
В фильтрате после отделе­ния щавелевокислого кальция остаются кальциевые соли остальных двух кислот - лимонной и глюконовой. При­бавлением аммиака до розовой окраски с фенолфталеином и выпариванием на водяной бане в фарфоровой чашке до 25 - 30 мл лимоннокислый кальций переводят в осадок белого цвета. Последний еще в горячем виде отфильтровывают на предварительно взвешенном фильтре, промывают минимальным количеством горячей воды и высушивают на фильтре при 35 - 50°С до постоянного веса.

Чистый вес осадка умножают на 0,674 для перевода на безводную лимонную кислоту.

Определение глюконовой кислоты.
Кислота может быть определена по разности, оставшейся после вычета из титруемой кислотности щавелевой и лимонной кислот. Кроме того, ее опре­деляют непосредственно в фильтрате, из которого предыдущими анализами удалены две первые кислоты. Фильтрат упаривают на водяной бане до 10 - 15 мл и количественно переводят во флакон с пробкой, смывая минимальным количеством горячей воды. Прибавляют 3 объема 96° этилового спирта при помеши­вании. Спустя 2 - 3 суток осадок кристаллизуется. Его отделяют на фильтре Нуча, высушивают при 80—90°С и взвешивают. Вес умножают на 0,911 и получают количество безводной глю­коновой кислоты в 100 мл культуры, взятой для анализа всех трех кислот.

1.


Автор..............................................................................И. Л. Дикий.
Название......Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям.
Издательство......................................"Золотые страницы", Харьков.
Год.............................................................................................2002.
Формат........................................................................................pdf.
Язык......................................................................................Русский.
Размер.....................................................................................10 Мб.
Страниц.......................................................................................444.
ISBN....................................................966-615-133-2 и 966-8032-45-4.
Для сайта..........................................https://twitter.com/ClPropionicum

В пособии представлены современные методы лабораторных иссле­дований в области микробиологии, вирусологии, паразитологии и им­мунологии. Изложены методы идентификации возбудителей инфекци­онных болезней.

Издание рассчитано на студентов и преподавателей фармацевтиче­ских и медицинских вузов, врачей-бактериологов, вирусологов и имму­нологов.

Микробиологическая лаборатория в зависимости от ее профиля обеспечивается необходимым для работы количеством помещений, среди которых гардероб для персонала, препараторская, бактериоло­гическая комната с боксами для работы с отдельными группами бакте­рий и вирусов, средоварочная, моечная, стерилизационная, виварий с раздельным содержанием здоровых и подопытных животных. Поме­щения лаборатории, в которых проводится работа с возбудителями заразных болезней, располагаются в отдельном здании или его изоли­рованной части и имеют не менее двух входов.

Лабораторию оборудуют водопроводом, канализацией, центральным отоплением, обеспечивают электроэнергией, горячим водоснабжением и газифицируют.

Скачать бесплатно книгу "Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям".

Содержащийся в растительных клетках полисахарид крах­мал разлагается относительно немногими известными микроор­ганизмами. Кроме того, разные сорта крахмала разлагаются ими по-разному. Что касается микро­организмов, принимающих уча­стие в разложении крахмала, то необходимо отметить наличие у них мощного комплекса фермен­тов, под действием которых про­исходит гидролиз крахмала через декстрины и мальтозу до глюкозы.

Для выделения микробов, гидролизующих крахмал, их высе­вают в чашку на агар с 1 % оклейстеризованного крахмала. Вокруг колонии микроорганизмов, клейстер гидролизуется с обра­зованием прозрачных ореолов (см.фото). Таким же образом, т. е. положив комочки почвы на агар, можно обнаружить микро­бов, разлагающих крахмал в поч­ве. Если чашки облить раствором йода, то среда окрасится в синий цвет. Ореолы же окрасятся либо в красновато-бурый - гидролиз дошел до стадии декстри­нов, либо они останутся бесцветными - весь крахмал перешел в сахар. Лучшие результаты в опытах по разложению крахмала микробами получаются при работе с растворимым крахмалом. Для приготовления последнего берут 100 г картофельного крах­мала, заливают 150 мл 7,5-процентной НСl в выдерживают при комнатной температуре в течение 2 суток, дважды меняя кислоту. После этого крахмал промывают водой, а затем разбавленным раствором соды и высушивают.

В пивоваренной промышленности и в хлебопечении для осахаривания крахмала используют амилазу грибов Asp. niger и Asp. oryzae.

Для демонстрации можно рекомендовать следующий опыт. 100 г пшеничных отрубей замешивают на воде до получения рассыпчатой влажной массы, помещают в широкодонную колбу и стерилизуют в автоклаве. После стерилизации в остывшую массу вносят 1 - 2 мл водной взвеси спор гриба Asp. oryzae, тщательно перемешивают и на 3 - 4 суток оставляют в термо­стате при 24 - 25° С. Когда гриб хорошо разовьется по всей поверхности среды и в ее толше, его извлекают из колбы и не­большими порциями прибавляют к заранее приготовленному и разлитому в колбы 1 - 2-процентному крахмальному клейстеру. Можно предварительно получить водную вытяжку фер­мента. Для этого гриб сначала растирают в ступке вместе с толчёным стеклом, ферменты экстрагируют водой, а затем поступают так, как описано выше. Осахаривание проверяют про­бой на иод.

Фото: гидролиз крахмала азотобактером на агаре с 0,5% растворимого крахмала (возраст культуры 7 суток), а так же сам Азотобактер.

1.


2.

Процесс окисления водорода при помощи микроорганизмов можно вызвать, если внести почву в среду следующего состава:

KN03 - 2 г, NаНСОз - 1 г, К2НР04 - 0,5 г, MgS04х7Н20 - 0,2 г, FeCI3 - следы, дистиллированной воды - 1 л.

Среду в колбу наливают низким слоем, после посева наполняют гремучим газом и выдерживают при 29 - 33°С. Для изолирования возбудителя употребляют мясопептонный агар (который предварительно выщелачивают в воде), содержащий соли:

KN03 - 0,1%, К2HР04 - 0,1%.

Метан, входящий в состав природного, рудничного пли бо­лотного газов, под воздействием некоторых микроорганизмов окисляется ими до углекислоты и воды. Для окисления метана и выделения возбудителя этого процесса Вас. methanicus колбу, содержащую питательную среду следующего состава (в г):

NH4MgP04 - 1г, К2НР04 - 0,5, CaS04 - 0.1, дистиллированной воды - 1 л.

Заражают навозом, сточной водой или огородной землей. После этого в колбу, снабженную резиновой пробкой со вставленными двумя стеклянными трубками с кранами, под некоторым давлением вводят через одну из трубок метан (второй кран в это время находится открытым для выхода воздуха). Закрыв оба крана, колбу оставляют на 3 - 4 дня при 30 - 37°, в течение которых бактерии успеют развиться — на поверхности жидкости образуется красноватая пленка метановых бактерий.

Г. А- Баркер предложил для метановых бактерий следую­щую среду (в %):

NH4Cl - 0,075, К2НРО4 - 0,04, MgCl2 - 0,0I, СаСОз - 2, С2Н5ОН - 1 (в мл), в водопроводной воде.

Для получения накопительной культуры бактерий в среду вносят осадок сточной воды из метан-тэнка. Достаточным критерием интенсивного развития бактерий в среде является содержание метана до 20% в газе, выделяющемся при разложении спирта.




1.


2.


3.

Анаэробное разложение клетчатки большей частью наблюдается в почвах болот. Оно происходит по типу маслянокислого брожения с образованием газообразных продуктов— метана, водорода, углекислого газа, летучих жирных кислот и иногда спирта. Анаэробное разложение клетчатки происходит под действием целлюлазы различных анаэробных бактерий, которые обитают в почве, навозе, на различных растительных тканях, в рубце жвачных животных. Приведем общую, схему этого процесса:

(C6H10O5)n + H2O = nxC6H12O6 nxC6H12O6 = CH3CH2CH2COOH + CH3COOH + H2 + CO2 + X калорий nxC6H12O6 = CH3CH2CH2COOH + CH3COOH + CO2 + CH4 + X калорий

Чтобы вызвать такой распад клетчатки в высокогорлые колбы или высокие пробирки наливают высоким слоем (30 см) одну из сред следующего состава:

1). KNH4HPO4 - 0,2%; KH2PO4 - 0,1%; CaCl2 - 0,03%; пептон - 0,1%; MgSO4 - 0,05%; CaCO3 - 0,5%; кусочки фильтровальной бумаги или вату - 2 г;

2). Среда А. А. Имшенецкого:
Мясо-пептонный бульен - 500 мл; водопроводная вода - 500 мл; CaCO3 - 2 г; кусочки фильтровальной бумаги или вату - 10 г;

После стерилизации в колбы вносят почву, ил или навоз, содержащие целлюлозные бактерии, и выдерживают 1—3 недели при 30 - 35° С. Развитие этих бактерий сопровождается интенсивным помутнением среды, пенообразованием и изменением клетчатки. Фильтровальная бумага слегка желтеет, покрывается слизью и постепенно разрушается бактериями. При активном разложении бактериями фильтровальная бумага превращается в рыхлую массу, состоящую из отдельных волокон. Это лучше удается получить при помощи обогащенных культур целлюлозо-разлагающих бактерий, полученных путем ряда последовательных пересевов их на свежую среду.

Известно, что процесс разложения клетчатки может иметь направление метанового или водородного брожения. Такой тип реакции имеет место тогда, когда посевной материал предварительно прогревается при 75°С в течение 15 мин. В данном случае культуры образуют H2 и СO2. Для того чтобы вызвать метановое брожение, нагревание посевного материала не производят. В этом случае из летучих продуктов образуются СH4 и СO2.

Элективные условия в брожении клетчатки определяются следующими факторами:

1). Клетчаткой (источник.углерода), которая может потребляться только специфичными целлюлозоразлогающими бактериями, имеющими фермент целлюлазу;

2). Анаэробиозом. Пептон, введенный в среду в небольшом количестве, практически не нарушает элективности среды, но сильно стимулирует процесс. В процессе брожения целлюлозы участвует бактерия Clostridium omelianskii. На рисунке показана схема спорообразования у этой бактерии: 1. Молодые клетки; 2. Клетки со спорами; 3. Споры;


В разложении клетчатки принимают участие также термофильные целлюлозоразлагающие бактерии, развивающиеся при 60° С. Для их накопления рекомендуется среда следующего состава:

NaNH4HPO4 - 1 г; KH2PO4 - 0,5 г; K2HPO4 - 0,5 г; MgSO4 - 0,4 г; NaCl - 0,1 г; MnSO4 и FeSO4 - каждого по 1 капле 1-процентного раствора, пептон - 5 г; СаСО3-2 г; водопроводная вода - 1000 мл; рН = 7,0-7,4.

Среду высоким слоем наливают в сосуд, содержащий клетчатку слоем 1—2 см, стерилизуют и заражают конским навозом. На 3-5 сутки при 60° С начинается брожение с выделением газа. Бумага теряет свой первоначальный вид, появляется желтоватый оттенок, затем она превращается в аморфную массу. Микроскопические наблюдения показывают, что на волокнах содержатся бактерии—длинные тонкие палочки, с одной спорой на конце. Заражая кусочками разложившейся бумаги свежую среду, мы таким образом получим накопительную культуру этих бактерий. Из нее можно получить чистую культуру путем нагревания накопительной культуры при 100° С с последующим посевом ее в свежую среду. Из бактерий чаще встречаются Clostridium dissolvens. Среди продуктов термофильного разложения клетчатки найдены этиловый спирт, масляная, муравьиная, уксусная и молочная кислоты, водород и углекислый газ. Для обнаружения газообразных, продуктов готовят плотную среду следующего состава: целлюлоза — 20 г (растертая фильтровальная бумага); углекислый кальций — 20 г; агар — 20 г; среды с пептоном и фекальным экстрактом—1000 мл; рН = 7,2-7,3. Засеянные пробирки с плотной средой, разлитой высоким слоем, выдерживают при 60° С. Бактерии, развиваясь в среде, образуют газ, который дает трещины и разрывы в агаре.

1.


2.


3.